人受體ELISA試劑盒的實(shí)驗(yàn)原理及操作步驟介紹

　　人受體ELISA試劑盒的實(shí)驗(yàn)原理：
 

　　試劑盒采用間接法酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)。往預(yù)先包被人受體抗體(AIRA)捕獲抗原的包被微孔中，依次加入標(biāo)本、標(biāo)準(zhǔn)品、HRP標(biāo)記的檢測抗體，經(jīng)過溫育并洗滌。用底物TMB顯色，TMB在過氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成最終的黃色。顏色的深淺和樣品中的人抗胰島素受體抗體(AIRA)呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm波長下測定吸光度(OD值)，計(jì)算樣品濃度。
 

　　人受體ELISA試劑盒的操作步驟：
 

　　1、從室溫平衡20min后的鋁箔袋中取出所需板條，剩余板條用自封袋密封放回4℃。
 

　　2、設(shè)置標(biāo)準(zhǔn)品孔和樣本孔，標(biāo)準(zhǔn)品孔各加不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)品50μL；
 

　　3、樣本孔中加入待測樣本50μL；空白孔不加。
 

　　4、除空白孔外，標(biāo)準(zhǔn)品孔和樣本孔中每孔加入辣根過氧化物酶(HRP)標(biāo)記的檢測抗體100μL，用封板膜封住反應(yīng)孔，37℃水浴鍋或恒溫箱溫育60min。
 

　　5、棄去液體，吸水紙上拍干，每孔加滿洗滌液(350μL)，靜置1min，甩去洗滌液，吸水紙上拍干，如此重復(fù)洗板5次(也可用洗板機(jī)洗板)。
 

　　6、每孔加入底物A、B各50μL，37℃避光孵育15min。
 

　　7、每孔加入終止液50μL，15min內(nèi)，在450nm波長處測定各孔的OD值。